2、 慢病毒载体系统构建服务
技术服务详细描述
慢病毒（Lent virus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，达到持久性表达。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景
实验流程如下：
1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体；
2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒；
3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；
4. 浓缩、纯化病毒液；
5. 用高质量的病毒液感染细胞；
6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度（高精确滴定方法）和Western 分析实验结果；
7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞；检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进行稳定转染细胞株的筛选，通常状况下，筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。
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