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人脂蛋白相关磷脂酶A2酶免试剂盒.

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产品名称: 人脂蛋白相关磷脂酶A2酶免试剂盒.
产品型号: E0900100205
产品展商: 上海百沃科技有限公司
简单介绍
使用前彻底阅读说明书。Lp-PLA2(lipoproteinassociatedphospholipase A2脂蛋白相关磷脂酶A2),人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp—PLA2)又称血小板活化因子乙酰水解酶(PAF—AH),主要由巨噬细胞合成和分泌。大部分Lp—PLA2与低密度脂蛋白结合,能水解灭活血小板活化因子,水解低密度脂蛋白上的氧化磷脂,生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸,因此既有抗炎抗动脉


人脂蛋白相关磷脂酶A2酶免试剂盒.的详细介绍

Human-Lipoprotein Associated Phospholipase A2 ELISA KiT
人脂蛋白相关磷脂酶A2
产品编号:E0900100205
概述
使用前彻底阅读说明书。Lp-PLA2(lipoproteinassociated
phospholipase A2脂蛋白相关磷脂酶A2),
人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp—PLA2)又称血小板
活化因子乙酰水解酶(PAF—AH),主要由巨噬细胞合成
和分泌。大部分Lp—PLA2与低密度脂蛋白结合,能水解
灭活血小板活化因子,水解低密度脂蛋白上的氧化磷脂,
生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸,因此既有抗炎抗动
脉粥样硬化,又有促炎促动脉粥样硬化的作用。该ELISA
Kit能测量人LP-PLA2含量,只能用于研究用途,不得用
于医学诊断。
工作原理
所提供的ELISA Kit是典型的竞争法酶联免疫吸附测定
试剂盒(ELISA)。试剂盒中将抗LP-PLA2抗体包被在微
孔板上,酶联亲和物中含有标记了过氧化物酶的LPPLA2
。试验过程中,标准品、待测样本中的LP-PLA2与标
记有酶联亲和物的LP-PLA2共同竞争反应板上包被的抗
LP-PLA2抗体的定量结合位点。反应后冲洗掉未结合的部
分,再加入底物反应,底物在酶的作用下变为蓝色,并在
酸的作用下转化成最终的黄色。通过比较待测样本与LPPLA2
标准品的吸光度,可准确测得样本中的LP-PLA2含
量。
试剂盒组分
需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 自动洗板机。
4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5. 蒸馏水,容量瓶等
6. 干净的试管
注意事项
1. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟;
2. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试
管;
3. 本试剂盒中不含有传染性试剂,仅供科研体外诊断
使用;
4. 有效期内使用,不可混用不同批号的试剂及包被微
孔板;
5. 试验过程中必须充分混匀;
6. 冲洗过程中必须冲洗充分、扣干,否则将影响结果
精确度;
7. 包被微孔板必须干燥保存,避免受潮;
8. 试验完毕后,将剩余试剂放置2-8℃保存;
材料96 test / 48 test
已稀释完的标准品1ml×5瓶
预包被抗体的微孔板96T(一块)/48T(一块)
酶联亲和物6ml×1瓶/ 3ml×1瓶
显色液A 6ml×1瓶/ 3ml×1瓶
显色液B 6ml×1瓶/ 3ml×1瓶
终止液6ml×1瓶/ 3ml×1瓶
ELISA专用洗涤液50ml×1瓶/ 25ml×1瓶
【1:10倍蒸馏水稀释】
9. 试验过程中必须严格按照说明书进行操作,顺序不
得颠倒;
10. 大量样本操作时,应注意加样时间,避免加样缓慢
或间隔时间过长;
11. 储存和使用显色B液时应避光;
12. 试验过程中,室温应始终保持在18-28℃;
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几
层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;重复此过程5次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正
式实验过程中。
样品的准备和保存
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存(-20℃),且避
免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液后尽快将血清和红细胞通
过离心分离,收集血清。若短时间内分析,可存放在2-8
℃。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析
或分装后-20℃冷冻保存。
本试剂盒提供的标准品及其他组份为方便用户使用均为
已按照试验标准稀释过的。
正常情况下所绘制的标准
曲线应为自上向下的一条
直线。
操作程序
1. 试验前将试剂盒及待测标本放置室温平衡(18-
28℃)并确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板
孔数目。
2. 将标准品各100μl依次加入一排孔中,处理后的标
本按100ul每孔加入,并做好标记。
3. 在标准品孔及待测样本孔中分别加入50μl酶联亲
和物,充分混匀。
4. 37℃温育60分钟后充分弃尽各孔内液体,用稀释
好的洗涤液反复冲洗5次并扣干孔内剩余水份。
5. 每孔依照次序,分别加入显色液A、显色液B各
50μl,充分混匀,在室温下避光反应15分钟。
6. 反应过后(正常情况下应为蓝色并带有明显的梯
度)每孔加入终止液50μl,充分混匀(正常情况下
应转变为黄色),终止反应。
7. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
标准品
1.2 pg →S0
6 pg
24 pg
60 pg
120 pg
结果计算
1. 分别计算各标准品及待测样本的S/S0%数值
S=标准品或样本O.D值
S0=上图所示S0点O.D值
2. 以标准品浓度作为横坐标,S/S0%数值为纵坐标,在
对数坐标纸上绘制标准曲线
3. 在绘制好的标准曲线图上查找每个样本所对应的浓度
操作程序总结:
准备试剂,样品和标准品
加入准备好的样品、标准品以及酶联亲和物,37℃温育
反应60分钟
洗板5次,加入显色液A/B室温避光反应15分钟
加入终止液,终止反应
30分钟之内读O.D值
计算标本待测因子含量
检测范围:1.2pg/ml→120pg/ml
敏感性: <0.3pg/ml
特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。
有效期: 6个月(2→8℃保存)
检测介质:血清或血浆
重要说明:
1. 如试验需要做空白对照孔,则需先预留一个孔并做好
标记,但孔内不能加入任何样本。随标准孔和待测样本孔
一起温育。显色过程显色液A、B以及终止液都照常按说
明书要求去做,清洗过程也照旧,但切记要清洗充分。然
后在450nm下读取O.D值即可。
2. 清洗过程一定要充分彻底,否则会影响精度对结果造
成一定程度的影响。



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