ELISABIO ELISA常见样本的处理方法—组织样本

发布时间：2021/5/26 17:32:48 阅读次数：1194

ELISA（酶联免疫吸附剂测定）是一种快速灵敏准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用. 利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液（血清血浆）,组织匀浆细胞裂解液细胞培养上清以及不常见的皮肤组织尿液粪便肺泡灌洗液唾液脑脊液胸腹水前列腺液精液阴道分泌物等,这些样本收集的时间处理方法和保存都会影响到
ELISA实验的结果.
下面就常见ELISA组织样本处理方法的整理,希望对您有所帮助.
组织样本一般是制成组织匀浆,处理方法如下:
1）取适量组织块,于预冷PBS（0.02mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液,称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；
2）可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入 5-10ml预冷PBS（组织与 PBS 的质量体积比建议为 1:10,即1g 样本加入 10ml PBS）进行充分研磨（有条件实验室可选用机器匀浆）,该过程需在冰上进行；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复 2 次） .
3）将制备好的匀浆液于5000×g 离心 5分钟,留取上清即可检测.
4）如果样本需要长期保存,请添加蛋白酶抑制剂.根据实验需要,组织匀浆样本可先定量总蛋白,以便于统计分析数据.某些组织样本如肝脏,肾脏,脑组织会有假阳性反应.
处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程,由于蛋白容易变性,降解,故该过程应尽量温和.样本处理之后的储存也非常重要,尤其注意不要反复冻融,样本处理之后可分装密封保存, 4 度保存应小于 1 周,-20 度不应超过 1 个月,-80度不应超过2个月.在标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解.样本的处理是实验成功的第一步, ,以上就是关于常见样本处理方法的一个简述,供研究者参考.