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试验原理
本试剂盒采用竞争ELISA法，往预先包被目的蛋白抗体的微孔板中依次加入样本、标准品和生物素标记抗原，经过温育洗涤，再加入酶标试剂（SA-HRP）温育。再次洗涤后加入底物TMB显色，室温显色并用终止液终止反应后读取OD值。OD值高低和样品中的目的蛋白呈负相关。
试验所需自备试验器材
1、酶标仪（450nm）
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml 量筒
试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温120min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。
操作程序
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1.将各种试剂移至室温平衡两小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1：20稀释，混匀后备用。
2.将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设2孔，每孔加入对应校准品15μl；其余每个检测孔直接加待测样品或标准品15μl。
3.除空白孔外所有孔加入生物素抗原 100μl，混匀，贴上封板膜，置37℃温育60分钟。
4.手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。
5.每孔加入酶标试剂（SA-HRP）100μl（空白对照孔除外），混匀，贴上封板膜，置37℃温育30分钟。
6.手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。
7.每孔加显色液TMB 100μl，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液100μl。
用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD值）。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数(x n)。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
声明
该试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。
温馨提示
本公司提供代测服务，凡购买本公司ELISA试剂盒的客户，均可享受免费的ELISA代测服务。
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1. 客户服务--如果我们不能使客户满意，会有其他人这么做。 向以“服务、客户、技术”为根本。客户是 的核心；客户是我们的服务、产品质量的定义者， 秉持：诚信原则，非常重视客户的意见与感受；在所提供的品质产品及服务中获得合理利润的前提下，使我们尊敬的客户满意是至关重要的！因为如果我们做不到，会有其他人这么做。
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